蛋白半胱氨酸侧链烷基化
反应方程
Prot-Cys-SH + Br-CH2-CH2-N^+^(CH3)3 → Prot-Cys-S-CH2-CH2-N^+^(CH3)3
分子量+86
配制溶液
反应缓冲液:6M GnHCl, 100mM PBS, 5mM TCEP,pH8.8
BETAB(2-溴乙基三甲基溴化铵):2M储液(500mg/mL),用水溶解
步骤
1 蛋白用反应缓冲液溶解至0.6mM的浓度,pH调整至大致8.5
2 加入BETAB储液至终浓度为300-500mM(约500-800当量),pH调整至8.5-8.8,37度摇床反应
3 反应2-3h 后用C4柱子监测反应并纯化。
常见问题
1 反应3h没有反应完:补加一定当量的BETAB
2 小分子和蛋白产物一起冲出:梯度设靠后一些,小分子的峰应该会出比较大