蛋白半胱氨酸侧链烷基化

Sulfhydryl alkylation to afford methylated proteins
Sulfhydryl alkylation to afford methylated proteins

反应方程

Prot-Cys-SH + Br-CH2-CH2-N^+^(CH3)3 → Prot-Cys-S-CH2-CH2-N^+^(CH3)3

分子量+86

配制溶液

反应缓冲液:6M GnHCl, 100mM PBS, 5mM TCEP,pH8.8

BETAB(2-溴乙基三甲基溴化铵):2M储液(500mg/mL),用水溶解

步骤

1 蛋白用反应缓冲液溶解至0.6mM的浓度,pH调整至大致8.5

2 加入BETAB储液至终浓度为300-500mM(约500-800当量),pH调整至8.5-8.8,37度摇床反应

3 反应2-3h 后用C4柱子监测反应并纯化。

常见问题

1 反应3h没有反应完:补加一定当量的BETAB

2 小分子和蛋白产物一起冲出:梯度设靠后一些,小分子的峰应该会出比较大